超高壓輔助法制備苦瓜總皂苷及其純化方法與流程

1.本發明屬于食品醫療技術領域，涉及一種超高壓輔助法制備苦瓜總皂苷及其純化方法。


背景技術：

2.皂苷類物質是由異戊二烯衍生的苷元共價連接一個或多個糖基組成的一類化合物。由于皂苷中親脂性皂苷元與親水性糖側鏈連接，導致皂苷具有親脂性和親水性，其水溶液在搖晃時會產生類似于肥皂的持續性泡沫，故而得名皂苷。大多數已知的皂苷是植物衍生的次生代謝物，但也有研究發現，在海洋動物海參和海星體內也存在幾種皂苷。
3.苦瓜皂苷是一類苷元為三萜或甾體化合物的糖苷類化合物，由糖和苷元組成，每一種苦瓜皂苷類物質的區別在于含有不同的苷元結構?？喙显碥崭鶕浠瘜W結構可分為三萜皂苷和甾體皂苷兩大類?，F有研究已從苦瓜及其提取物中分離純化出苦瓜苷、苦瓜素等240多種葫蘆烷型化合物。
4.皂苷類物質具有降血糖、抗炎、抗癌、改善便秘等多成功效?？喙现械纳锘钚猿煞钟性碥疹?、蛋白質、多糖、多酚類、固醇類等。其中皂苷類物質不僅能夠通過調節機體細胞對葡萄糖的攝取，降低機體血糖水平，還可以通過多種途徑起到緩解炎癥的作用，除此之外，在抗癌、改善便秘等方面都發揮重要作用。
5.近年來已有多種技術應用到皂苷的提取中，包括超高壓技術、溶劑浸提技術、超聲波技術、微波技術、回流提取法等。其中溶劑浸提法所使用的多為有機溶劑，有較高的毒性和揮發性，且提取時間長、效率低下；超聲波提取法和微波輔助提取法提取率低；回流提取法耗時長、操作復雜。與上述方法相比，超高壓技術在生物活性成分提取方面具有操作簡單、提取時間短、提取效率高等優點。
6.苦瓜提取物含有多種物質，是一個混合體系，因此皂苷類物質純度較低不足以滿足后續的研究，更不能滿足工藝條件產業化的需求。為獲得高純度的皂苷，需要對苦瓜提取物進行純化，以提高皂苷類物質的純度。
7.皂苷純化的方法主要有大孔樹脂吸附法、雙水相體系法、液液萃取法、膜分離法等，其中大孔樹脂吸附法最為常見。然而苦瓜皂苷多為葫蘆烷型三萜類化合物，具有較高的親水性，且組分復雜與雜質分離困難，上述純化皂苷的方法多用到有機溶劑，其揮發性和毒性對環境和人類健康不利，難以高效環保的獲得純度較高的皂苷類物質。近年來，雙水相技術已被用于純化多種材料中的皂苷類物質，具有操作簡單、效率高、耗能小等優點。


技術實現要素：

8.有鑒于此，本發明提供一種超高壓輔助法制備苦瓜總皂苷及其純化方法，其采用的試劑無揮發性和毒性，可高效環保的獲得純度較高的皂苷類物質。
9.為解決現有技術存在的問題，本發明的技術方案是：超高壓輔助法制備苦瓜總皂苷及其純化方法，其特征在于：所述的方法步驟為：
10.步驟1)對苦瓜進行清洗、切塊、烘干、粉碎，然后過60目篩制成苦瓜粉；
11.步驟2)稱取苦瓜粉，通過乙醇溶液進行超高壓提取，獲得苦瓜總皂苷提取液；
12.步驟3)將提取液離心，收集上清液，在40℃、轉速90r/min的條件下旋轉蒸發至無乙醇味，冷凍干燥后獲得苦瓜總皂苷粉末；
13.步驟4)稱取適量粗提苦瓜總皂苷粉末，按照料液比溶解于1
?
丁基
?3?
甲基咪唑四氟硼酸鹽溶液中；
14.步驟5)室溫充分攪拌，加入naoh溶液，漩渦震蕩至形成兩相；
15.步驟6)在4℃、4000r/min的條件下離心至兩相充分分離；
16.步驟7)收集富含皂苷的naoh下相，用鹽酸中和，冷凍干燥獲得純化后的苦瓜總皂苷粉末。
17.進一步，步驟2)的提取壓力為300
?
600mpa，保壓時間為2
?
14min，乙醇濃度為55％
?
85％，苦瓜粉與乙醇溶液的料液比為1:15
?
45g/ml。
18.進一步，步驟4)的料液比為1:6
?
14，1
?
丁基
?3?
甲基咪唑四氟硼酸鹽的濃度為0.5
?
2.5mol/l。
19.進一步，步驟5)的naoh濃度為6.0
?
14.0％。
20.與現有技術相比，本發明的優點和效果如下：
21.1)本發明采用超高壓提取，具有提取溫度低、提取時間短、提取效率高等優點，同時還避免了熱效應對生物活性成分的破壞。
22.2)本發明提取技術操作簡便，能夠較大程度的保留苦瓜總皂苷的生理活性，滿足消費者對產品功能性和療效的需求，具有廣闊的應用市場。
23.3)本發明的目的是通過研究提取壓力、保壓時間、乙醇濃度以及料液比對苦瓜總皂苷提取量的影響，進一步確定苦瓜總皂苷的最佳提取工藝參數，為超高壓提取苦瓜中的皂苷類物質提供依據。
24.4)本發明所使用的試劑無揮發性和毒性，對環境和人類無害；
25.5)本發明所使用的1
?
丁基
?3?
甲基咪唑四氟硼酸鹽離子液體，具有低揮發性、高穩定性，它能夠通過多種陽離子與陰離子的組合設計，達到提取苦瓜總皂苷的目的；
26.6)本發明利用naoh進行萃取分層，可較好分離苦瓜總皂苷和溶劑，達到純化的目的；
27.7)本發明使用1
?
丁基
?3?
甲基咪唑四氟硼酸鹽離子液體對苦瓜總皂苷進行純化，可獲得較高純度的苦瓜總皂苷；
28.8)本發明純化后苦瓜總皂苷純度為76.06％，提取方法苦瓜總皂苷提取量為127.890mg/g。
29.9)本發明以單因素試驗為基礎，利用box
?
behnken方法進行試驗設計，以苦瓜總皂苷的提取量為響應值，得到最佳提取條件。
附圖說明
30.圖1為提取壓力對苦瓜總皂苷提取量的影響；
31.圖2為保壓時間對苦瓜總皂苷提取量的影響；
32.圖3為乙醇濃度對苦瓜總皂苷提取量的影響；
33.圖4為料液比對苦瓜總皂苷提取量的影響；
34.圖5a為處理壓力與保壓時間對苦瓜總皂苷提取量的響應面圖；
35.圖5b為處理壓力與乙醇濃度對苦瓜總皂苷提取量的響應面圖；
36.圖5c為保壓時間與乙醇濃度對苦瓜總皂苷提取量的響應面圖。
37.圖6為[c4mim]bf4濃度對苦瓜總皂苷純度的影響；
[0038]
圖7為料液比對苦瓜總皂苷純度的影響；
[0039]
圖8為naoh濃度對苦瓜總皂苷純度的影響；
[0040]
圖9a為[c4mim]bf4濃度和料液比對苦瓜總皂苷純度的響應面圖；
[0041]
圖9b為[c4mim]bf4濃度和naoh濃度對苦瓜總皂苷純度的響應面圖；
[0042]
圖9c為料液比和naoh濃度對苦瓜總皂苷純度的響應面圖。
具體實施方式
[0043]
為了使本發明專利的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合附圖和實施例，對本發明專利進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明專利，并不用于限定本發明專利。
[0044]
離子液體(ils)是一種液體鹽，具有低揮發性、高穩定性，它能夠通過多種陽離子與陰離子的組合設計，達到提取不同目標化合物的目的。本發明選取1
?
丁基
?3?
甲基咪唑四氟硼酸鹽([c4mim]bf4)作為離子液體，構建離子液體
?
堿性雙水相體系，對苦瓜提取物中的總皂苷進行純化。
[0045]
本實施例提供一種超高壓輔助法制備苦瓜總皂苷及其純化方法步驟為：
[0046]
步驟1)對苦瓜進行清洗、切塊、烘干、粉碎，然后過60目篩制成苦瓜粉；
[0047]
步驟2)稱取苦瓜粉，通過乙醇溶液進行超高壓提取，獲得苦瓜總皂苷提取液；
[0048]
提取壓力為300
?
600mpa，保壓時間為2
?
14min，乙醇濃度為55％
?
85％,苦瓜粉與乙醇溶液的料液比為1:15
?
45g/ml。
[0049]
步驟3)提取后的溶液離心，收集上清液，在40℃、轉速90r/min的條件下旋轉蒸發至無乙醇味，冷凍干燥后獲得苦瓜總皂苷粉末；
[0050]
步驟4)稱取適量粗提苦瓜總皂苷粉末，按照料液比為1:6
?
14溶解于1
?
丁基
?3?
甲基咪唑四氟硼酸鹽([c4mim]bf4)溶液；1
?
丁基
?3?
甲基咪唑四氟硼酸鹽的濃度為0.5
?
2.5mol/l；
[0051]
步驟5)室溫充分攪拌，加入適量濃度為6.0
?
14.0％的naoh溶液，漩渦震蕩至形成兩相；
[0052]
步驟6)在4℃、4000r/min的條件下離心至兩相充分分離；
[0053]
步驟7)收集富含皂苷的naoh下相，用適量鹽酸中和，冷凍干燥獲得純化后的苦瓜總皂苷粉末。
[0054]
本發明采用以下方法測定苦瓜總皂苷含量，并計算苦瓜總皂苷提取量：
[0055]
將步驟3)獲得的凍干粉用乙醇復溶至10ml得粗苦瓜總皂苷溶液；
[0056]
標準曲線的配置：稱取20mg薯蕷皂苷標品，用乙醇定容至50ml。用乙醇稀釋溶液分別配制濃度為0μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml、250μg/ml、300μg/ml的薯蕷皂苷標品溶液。按照梯度濃度吸取250μl標準品，加入250μl香草醛溶液，充分渦旋震蕩后加
入2.5ml 72％的濃硫酸，60℃水浴反應10min，冷卻后用酶標儀于544nm處測定吸光值并繪制標準曲線。
[0057]
苦瓜總皂苷提取量(mg/g)＝c/m
[0058]
其中c是提取物中苦瓜總皂苷的含量，m代表苦瓜粉的重量。
[0059]
1、單因素試驗：
[0060]
選取四個主要影響苦瓜總皂苷提取量的因素，即：處理壓力、保壓時間、乙醇濃度及料液比進行單因素試驗；稱取1.0g苦瓜粉末，以提取量為響應值，選取處理壓力300、350、400、450、500、550、600mpa，保壓時間2、4、6、8、10、12、14min，乙醇溶液濃度55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％以及料液比1:15、1:20、1:25、1:30、1:35、1:40及1:45條件下得到提取液，分別考察各因素對苦瓜總皂苷提取量的影響；
[0061]
2、響應面優化試驗：
[0062]
在上述單因素試驗的基礎上，利用響應面分析法對提取條件進行進一步優化，根據box
?
behnken試驗設計原理，選取處理壓力(a)、保壓時間(b)、乙醇濃度(c)及料液比(d)等4個因素為自變量，以苦瓜總皂苷提取量為響應值(y)，進行四因素三水平的響應面試驗分析，得到適宜工藝參數。試驗因素與水平設計見表1：
[0063]
表1 響應面試驗設計因素與水平
[0064][0065]
3、單因素試驗結果：
[0066]
a：處理壓力對苦瓜總皂苷提取量的影響
[0067]
苦瓜總皂苷含量隨壓力變化為先增加后減少，在500mpa時，苦瓜總皂苷含量達到最大值，如圖1所示。因此500mpa為苦瓜總皂苷提取的最佳壓力條件。隨著壓力增大，苦瓜總皂苷含量增加，這是由于在超高壓作用下，樣品組織細胞破裂，苦瓜皂苷溶解更完全。當處理壓力超過500mpa時，苦瓜總皂苷含量下降，這可能是由于處理壓力過高時，組織細胞內外滲透壓差過大，其他大分子物質溶出，皂苷浸出受到影響。
[0068]
b：保壓時間對苦瓜總皂苷提取量的影響
[0069]
結果表明：苦瓜總皂苷含量隨保壓時間變化為先增加后減少，在保壓時間為8min時，苦瓜總皂苷含量達到最大值，如圖2所示。因此8min為苦瓜總皂苷提取的最佳保壓時間。隨著保壓時間增長，苦瓜總皂苷含量增加，這是由于溶劑與苦瓜皂苷接觸更為充分，當保壓時間過長，組織中的其他成分浸出，皂苷類成分的溶出傳質阻力增加。
[0070]
c：乙醇濃度對苦瓜總皂苷提取量的影響
[0071]
結果表明：當乙醇濃度為70％時，苦瓜總皂苷含量達到最大值，如圖3所示。因此70％為苦瓜總皂苷提取的最佳乙醇濃度。當乙醇濃度過低時，溶液極性較大，苦瓜皂苷溶解不完全；當乙醇濃度繼續增大時，由于溶液的介電常數與極性發生變化，組織細胞內蛋白質等大分子物質變性，產生凝聚，使得溶劑與苦瓜皂苷接觸不充分。
[0072]
d：料液比對苦瓜總皂苷提取量的影響
[0073]
結果表明：隨著料液比的增大，苦瓜總皂苷含量總體呈上升趨勢，如圖4所示。當料液比增加為1:30時，苦瓜總皂苷含量顯著性增加，這是由于料液比增大，組織細胞內的苦瓜皂苷從固液表面擴散進入液相主體過程的速率不斷增加；當料液比繼續增加時，苦瓜總皂苷含量變化不明顯，這可能是由于組織細胞內外皂苷的擴散速率達到平衡，料液比的繼續增大會造成提取溶劑的浪費，因此確定超高壓提取苦瓜總皂苷的適宜料液比為1:30。
[0074]
4、響應面優化結果
[0075]
表2 box
?
behnken響應面試驗設計及結果
[0076][0077][0078]
根據box
?
behnken原理設計試驗，將苦瓜總皂苷提取量作為響應值，按照單因素試驗結果，選擇處理壓力、保壓時間、乙醇濃度及料液比等4個因素進行響應面優化，試驗結果見表2；對試驗數據進行回歸分析后，擬合了響應值苦瓜總皂苷提取量(y)與處理壓力((a)、保壓時間((b)乙醇濃度(c)及料液比(d)的數學回歸模型，可用以下的函數來表示：
[0079]
y＝124.59+1.56a+0.77b
?
8.51c
?
2.46d
?
5.55ab
?
5.22ac
?
0.42ad
?
6.18bc+0.62bd+0.75cd
?
7.33a2?
6.98b2?
14.33c2?
4.80d2[0080]
表3 回歸模型的方差分析
[0081][0082]
**表示極顯著；*表示顯著；
[0083]
采用anova對模型進行統計分析，由表3可知模型回歸極顯著(p<0.01)；失擬項不顯著(p>0.05)，r2＝0.9209，adj r2＝0.8418，說明該模型能夠擬合真實水平，可以用其進行響應面優化試驗。處理壓力(a)、保壓時間(b)乙醇濃度(c)及料液比(d)的交互作用的響應面三維圖見附圖5(a
?
c)；各因素對苦瓜總皂苷提取量的影響大小順序為c>a>b>d，且a、b、c的p值均小于0.01，說明其對苦瓜總皂苷提取量的影響均極顯著。
[0084]
5、驗證試驗
[0085]
根據所得到的模型，分析得出在試驗范圍內苦瓜總皂苷最佳提取工藝條件為：處理壓力為509.86mpa，保壓時間為8.25min，乙醇濃度為68.16％、料液比為1:33.57，在此條件下苦瓜總皂苷理論提取量為126.712mg/g。為了驗證響應面法的可行性，參考模型給出的最佳條件，結合實際生產可操作性等因素，將最佳提取工藝調整為處理壓力510mpa，保壓時間8min，乙醇濃度68％、料液比1:35。在此條件下進行驗證試驗，結果顯示，苦瓜總皂苷提取量為127.890mg/g，與理論預測值相比誤差為0.929％。
[0086]
本發明采用以下方法苦瓜總皂苷純度：
[0087]
稱取一定量步驟7)純化后的苦瓜總皂苷粉末，用乙醇復溶至100ml，準確吸取5μl測定苦瓜總皂苷含量；
[0088]
標準曲線的配置：稱取20mg薯蕷皂苷標品，用乙醇定容至50ml。用乙醇稀釋溶液分別配制濃度為0μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml、250μg/ml、300μg/ml的薯蕷皂苷標品溶液。按照梯度濃度吸取250μl標準品，加入250μl香草醛溶液，充分渦旋震蕩后加入2.5ml 72％的濃硫酸，60℃水浴反應10min，冷卻后用酶標儀于544nm處測定吸光值并繪制標準曲線。
[0089]
苦瓜總皂苷提取量(mg/g)＝提取物中苦瓜總皂苷的含量/苦瓜粉的重量；
[0090]
苦瓜總皂苷純度(％)＝(純化后苦瓜總皂苷含量測定值/凍干粉重量)
×
100。
[0091]
本發明所述的方法，其中響應面法優化離子液體
?
堿性雙水相體系純化試驗；
[0092]
以單因素試驗為基礎，利用box
?
behnken方法進行試驗設計，以苦瓜總皂苷純度為響應值，得到最佳純化條件；
[0093]
1、單因素試驗：
[0094]
選取三個主要影響苦瓜總皂苷純度的因素，即：[c4mim]bf4濃度、料液比和naoh濃度進行單因素試驗；稱取0.5g苦瓜總皂苷粗提取物，以苦瓜總皂苷純度為響應值，選取[c4mim]bf4濃度0.5、1.0、1.5、2.0和2.5mol/l，料液比1:6、1:8、1:10、1:12和1:14，naoh濃度6.0％、8.0％、10.0％、12.0％和14.0％條件下得到純化苦瓜總皂苷粉末，測定其中苦瓜總皂苷的含量并計算純度，分別考察各因素對苦瓜總皂苷純度的影響；
[0095]
2、響應面優化試驗：
[0096]
在上述單因素試驗的基礎上，利用響應面分析法對純化條件進行進一步優化，根據box
?
behnken試驗設計原理，選取[c4mim]bf4濃度((a)、料液比((b)及naoh濃度(c)等3個因素為自變量，以苦瓜總皂苷純度為響應值(y)，進行三因素三水平的響應面試驗分析，得到適宜工藝參數。試驗因素與水平設計見表4：
[0097]
表4 響應面試驗設計因素與水平
[0098][0099]
3、單因素試驗結果：
[0100]
a：[c4mim]bf4濃度對苦瓜總皂苷純度的影響
[0101]
[c4mim]bf4濃度對苦瓜總皂苷純度的影響如圖6示。當[c4mim]bf4濃度從0.5mol/l增加至2.0mol/l時，苦瓜總皂苷的純度呈現逐漸增加的趨勢(p<0.05)，當濃度為2.0mol/l時，達到最大值71.49％。這是由于[c4mim]bf4具有很強的破壞細胞壁和溶解目標化合物的能力，隨著其濃度的升高，樣品組織細胞壁破裂，大量皂苷溶出與溶液中的naoh發生中和反應質子化，從而富集到naoh下相中，苦瓜總皂苷純度升高。當[c4mim]bf4濃度繼續增加到2.5mol/l時，苦瓜總皂苷的純度反而下降(p<0.05)，這是由于當[c4mim]bf4濃度太高時(>2.0mol/l)，不利于雙水相體系的形成，導致部分皂苷溶解在離子液體的上相中，沒有與溶液中的naoh發生中和反應富集到下相，因此導致苦瓜總皂苷純度下降。
[0102]
b：料液比對苦瓜總皂苷純度的影響
[0103]
料液比對苦瓜總皂苷純度的影響如圖7示。當料液比從1：6:增加至1：10時，苦瓜總皂苷的純度逐漸增加(p<0.05)，當料液比1：10時，達到最大值72.95％。這是由于隨著料液比的增加離子液體與樣品組織細胞接觸更完全，組織細胞壁破裂增加，大量皂苷溶出而富集在下相，導致苦瓜總皂苷純度增加。當料液比繼續增加時，苦瓜總皂苷的純度反而降低(p<0.05)，這是由于料液比過大會使溶出的皂苷類物質濃度偏低，影響其與naoh的中和反應，從而導致苦瓜總皂苷純度下降。
[0104]
c：naoh濃度對苦瓜總皂苷純度的影響
[0105]
naoh濃度對苦瓜總皂苷純度的影響如圖8示。當naoh濃度從6.0％增加至10％時，苦瓜總皂苷的純度呈現逐漸增加的趨勢(p<0.05)，當naoh濃度為10％時，達到最大值74.30％。這是由于隨著naoh濃度的增加，溶出的皂苷充分富集到下相，導致苦瓜總皂苷的純度增加。當naoh濃度繼續增加時，苦瓜總皂苷的純度變化趨于穩定，naoh濃度為12％、14％時與10％時相比，苦瓜總皂苷純度略有下降，但差異性不顯著(p>0.05)。這是由于當naoh濃度增加到一定值(10.0％)時，樣品組織中溶出的皂苷類物質基本被完全質子化，因此隨著naoh濃度的繼續增加苦瓜總皂苷純度變化并不顯著。
[0106]
4、響應面優化結果
[0107]
表5 box
?
behnken響應面試驗設計及結果
[0108][0109]
根據box
?
behnken原理設計試驗，將苦瓜總皂苷提取量作為響應值，按照單因素試驗結果，選擇[c4mim]bf4濃度、料液比及naoh濃度等3個因素進行響應面優化，試驗結果見表5；[c4mim]bf4濃度(a)、料液比(b)naoh濃度(c)的交互作用的響應面三維圖見附圖9(a
?
c)。對試驗數據進行回歸分析后，擬合了響應值苦瓜總皂苷提取量(y)與[c4mim]bf4濃度(a)、料液比(b)及naoh濃度(c)的數學回歸模型，可用以下的函數來表示：
[0110]
y＝74.94+6.41a+4.72b
?
0.51c+0.50ab+0.57ac
?
1.32bc
?
10.69a2?
10.00b2?
6.67c2[0111]
表6 回歸模型的方差分析
[0112]
[0113][0114]
**表示極顯著；*表示顯著；
[0115]
采用anova對模型進行統計分析，由表6可知模型回歸極顯著(p<0.01)，失擬項不顯著(p>0.05)，r2＝0.9819，adj r2＝0.9586，說明該模型能夠擬合真實水平，可以用其進行響應面優化試驗。
[0116]
通過比較f值可以判斷，各單因素對純度的影響大小順序為a>b>c，且a、b的p值均小于0.01，說明a和b對苦瓜總皂苷純度的影響極顯著，c的p值大于0.05，說明c對苦瓜總皂苷純度的影響不顯著；各因素的二次項影響大小為a2>b2>c2，且a2、b2、c2的p值小于0.01，說明對苦瓜總皂苷純度的影響均極顯著；
[0117]
5、驗證試驗
[0118]
根據所得到的模型，分析得出在試驗范圍內苦瓜總皂苷最佳純化工藝條件為：[c4mim]bf4濃度2.15mol/l，料液比1:10.49，naoh濃度9.90％，在此條件下苦瓜總皂苷純度為76.52％?？紤]到實際操作和儀器可調參數的局限性，將試驗參數進行調整為：[c4mim]bf4濃度2.15mol/l，料液比1:10.5，naoh濃度9.90％。在此條件下進行驗證試驗，結果顯示苦瓜總皂苷純度為76.06％，與理論預測值的相對誤差為0.60％。
[0119]
6、苦瓜總皂苷的組成鑒定
[0120]
本發明根據lc
?
ms的試驗結果對質譜數據進行分析，將苦瓜提取物中檢測到化合物的理論質荷數與其試驗質荷數之間進行比較，計算δppm值，以評價化合物的準確性。如果δppm值誤差在
±
50ppm之間，則認為該化合物為正匹配。
[0121][0122]
lc
?
ms結果如表4所示。質譜檢測表明在12.5
?
27.78min內能夠發現大量m/z為437.30的皂苷基礎骨架，這說明苦瓜提取物中含有皂苷類化合物，且皂苷類物質出峰時間集中在12.5
?
27.78min；苦瓜提取物中存在苦瓜苷a(m/z為657.41)、苦瓜苷l(m/z為658.45)、苦瓜素b(m/z為457.36)、苦瓜素j(m/z為455.34)四種葫蘆烷型三萜類化合物。
[0123]
表7 苦瓜提取物中的葫蘆烷型三萜類化合物
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本發明方法是一種新穎、高效的方法，通過單因素和響應面試驗優化出的最佳純
化工藝，為苦瓜總皂苷的純化研究提供了一定的參考性。
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以上所述，僅為本發明的較佳實施例而已，并非用于限定本發明的保護范圍。